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ELISA試劑盒的實(shí)驗步驟

發(fā)表時(shí)間:2018-03-14 16:40

ELISA試劑盒的操作方法,那么在操作過(guò)程中還有些細節要點(diǎn)需要注意:

在使用前與室溫平衡,再進(jìn)行測定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation),有人稱(chēng)之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。

ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì ),只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。

如果對ELISA試劑盒準備不太注意,在實(shí)驗時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題影響后面的操作。

1.測定中試劑的準備最為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗開(kāi)始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20min以上后,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度較快地達到所要求的高度,此外,ELISA試劑盒當試劑盒以OPD為底物時(shí),則底物溶液應在反應顯色前臨時(shí)配制。以滿(mǎn)足測定要求。
2. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),**做復孔。

3. 如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高,請先稀釋后再測定。

4. 在配制標準品、檢測溶液工作液時(shí),請以相應的稀釋液配制,ELISA試劑盒不能混淆。

5. 底物請避光保存。

6. 當混合蛋白溶液時(shí)應盡量輕緩,避免起泡。

7. 洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

8. 一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

9、控制好ELISA試劑盒每一步的操作時(shí)間。


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