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潰蝕齒密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒組成及試劑配制

發(fā)表時間:2020-12-04 15:31

潰蝕齒密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒組成及試劑配制:


1、酶標板:一塊(96孔)


2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。


3、 樣品稀釋液:1×20ml。


4、 檢測稀釋液A:1×10ml。


5、 檢測稀釋液B:1×10ml。   

實驗注意事項:


1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;


2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;


3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。


4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。


實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。


主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。


主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。



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