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產(chÇŽn)å“å稱(chÄ“ng) |  牛呼腸å¤ç—…毒(BRVï¼‰æ ¸é…¸æª¢æ¸¬(cè)試劑盒 |
è¦(guÄ«)æ ¼ | 48T/ç›’ |
類(lèi)別 | 熒光-PCR法 |
產(chÇŽn)å“å稱(chÄ“ng):牛呼腸å¤ç—…毒(BRVï¼‰æ ¸é…¸æª¢æ¸¬(cè)試劑盒
è¦(guÄ«)æ ¼ï¼š48T/ç›’
分類(lèi):熒光-PCR法
儲(chÇ”)å˜æ¢ä»¶ï¼š-20℃é¿å…‰ä¿å˜ï¼Œé¿å…å復(fù)å‡èžã€‚
é‹(yùn)輸:低溫ã€é¿å…‰ï¼Œå¿«éžå…è²»(fèi)é€è²¨ä¸Šé–€(mén)。
特點(diǎn):
1.å³é–‹(kÄi)å³ç”¨ï¼Œç”¨æˆ¶(hù)åªéœ€è¦æä¾›æ¨£å“ DNA 模æ¿ï¼Œæ“作簡(jiÇŽn)單,定é‡æº–(zhÇ”n)確快速。
2. 引物經(jÄ«ng)éŽ(guò)優(yÅu)化,特異性強(qiáng)。é (yù)期的 PCR 產(chÇŽn)物長(zhÇŽng)度為 560 bp。
3. PCR mix ä¸å«ä¸Šæ¨£æŸ“料,PCR åŽå¯ä»¥ç›´æŽ¥ä¸Šæ¨£é›»æ³³ã€‚
4. æ供陽(yáng)性å°(duì)照,便于分æžè©¦é©—(yà n)çµ(jié)果。注æ„äº‹é …(xià ng):
1.基礎(chÇ”)程åºï¼›
2.?dÄng)U增溫度和延伸溫度;
3.å應(yÄ«ng)時(shÃ)é–“ï¼›
4.循環(huán)次數(shù);
5.PCR å應(yÄ«ng)液的é…制;
6.PCR技術(shù)的基本原ç†ï¼›
7.PCRçš„å應(yÄ«ng)å‹•(dòng)力å¸(xué)ï¼›
8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;
9.PCRå應(yÄ«ng)體系與å應(yÄ«ng)æ¢ä»¶ã€‚
使用åŠæ•ˆæžœï¼š
PCRå應(yÄ«ng)特點(diÇŽn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCRå應(yÄ«ng)çš„ç‰¹ç•°æ€§æ±ºå®šå› ç´ ç‚ºï¼š
   ①引物與模æ¿DNA特異æ£ç¢ºçš„çµ(jié)åˆï¼›
ã€€ã€€ã€€â‘¡å ¿åŸºé…å°(duì)原則;
  ?ã€è·¿aq DNAèšåˆé…¶åˆæˆå應(yÄ«ng)çš„å¿ å¯¦(shÃ)性;
  ?ã€é¦¨è°¢î‹ƒè™»å¥¶ç¦ºæ„‹è€˜cä¿å®ˆæ€§ã€‚
å…¶ä¸å¼•ç‰©èˆ‡æ¨¡æ¿çš„æ£ç¢ºçµ(jié)åˆæ˜¯é—œ(guÄn)éµã€‚引物與模æ¿çš„çµ(jié)åˆåŠå¼•ç‰©éˆçš„延伸是éµå¾ªå ¿åŸºé…å°(duì)原則的。èšåˆé…¶åˆæˆå應(yÄ«ng)çš„å¿ å¯¦(shÃ)性åŠTaq DNAèšåˆé…¶è€é«˜æº«æ€§ï¼Œä½¿å應(yÄ«ng)ä¸æ¨¡æ¿èˆ‡å¼•ç‰©çš„çµ(jié)åˆ(復(fù)性)å¯ä»¥åœ¨è¼ƒé«˜çš„溫度下進(jìn)行,çµ(jié)åˆçš„ç‰¹ç•°æ€§å¤§å¤§å¢žåŠ ï¼Œè¢«æ“´(kuò)增的é¶åŸºå› 片段也就能ä¿æŒå¾ˆé«˜çš„æ£ç¢ºåº¦ã€‚å†é€šéŽ(guò)é¸æ“‡ç‰¹ç•°æ€§å’Œä¿å®ˆæ€§é«˜çš„é¶åŸºå› å€(qÅ«),其特異性程度就更高。
(2) éˆæ•åº¦é«˜
PCR產(chÇŽn)物的生æˆé‡æ˜¯ä»¥æŒ‡æ•¸(shù)æ–¹å¼å¢žåŠ 的,能將皮克(pg=10-12g)é‡ç´š(jÃ)的起始待測(cè)模æ¿æ“´(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100è¬(wà n)個(gè)ç´°(xì)胞ä¸æª¢å‡ºä¸€å€‹(gè)é¶ç´°(xì)胞;在病毒的檢測(cè)ä¸ï¼ŒPCRçš„éˆæ•åº¦å¯é”(dá)3個(gè)RFU(空斑形æˆå–®ä½);在細(xì)èŒå¸(xué)ä¸zuiå°æª¢å‡ºçŽ‡ç‚º3個(gè)ç´°(xì)èŒã€‚
(3) ç°¡(jiÇŽn)便ã€å¿«é€Ÿ
PCRå應(yÄ«ng)用è€é«˜æº«çš„Taq DNAèšåˆé…¶ï¼Œä¸€æ¬¡æ€§åœ°å°‡å應(yÄ«ng)æ¶²åŠ å¥½åŽï¼Œå³åœ¨DNAæ“´(kuò)增液和水浴é‹ä¸Šé€²(jìn)行變性-退ç«-延伸å應(yÄ«ng),一般在2~4 å°æ™‚(shÃ)完æˆæ“´(kuò)增å應(yÄ«ng)。擴(kuò)增產(chÇŽn)物一般用電泳分æžï¼Œä¸ä¸€å®šè¦ç”¨åŒä½ç´ ,無(wú)放射性污染ã€æ˜“推廣。
(4) å°(duì)標(biÄo)本的純度è¦æ±‚低
ä¸éœ€è¦åˆ†é›¢ç—…毒或細(xì)èŒåŠåŸ¹é¤Š(yÇŽng)ç´°(xì)胞,DNA 粗制å“åŠç¸½RNAå‡å¯ä½œç‚ºæ“´(kuò)增模æ¿??èŠè‹¯ä½‘é—¨R床標(biÄo)本如血液ã€é«”腔液ã€æ´—嗽液ã€æ¯›ç™¼(fÄ)ã€ç´°(xì)胞ã€æ´»PCR技術(shù)概論。