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牛棒桿菌探針?lè )晒舛縋CR 試劑盒 
牛棒桿菌探針?lè )晒舛縋CR 試劑盒
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品牌 : 一研
貨號 : GY-L510
規格 : 50T
價(jià)格 :
3800.00
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牛棒桿菌探針?lè )晒舛?/span>PCR 試劑盒


【產(chǎn)品名稱(chēng)】牛棒桿菌探針?lè )晒舛?/span>PCR 試劑盒

Name   Corynebacterium Bovis Probe qPCR Kit

【包裝規格】50次/盒                                                                    

【預期用途】牛棒狀桿菌病(Bovine Corynebacteriosis)是指由棒狀桿菌屬(Corynebacterium spp.)的某些細菌引起的膀胱炎和腎盂腎炎。臨床主要特征為頻尿、濁尿、血尿和發(fā)熱。該病主要見(jiàn)于成年母牛,多在妊娠期和產(chǎn)后發(fā)病。本病分布于世界各地。因此快速靈敏檢測牛棒桿菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據 PCR 原理開(kāi)發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽(yáng)性對照,便于區分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據牛棒桿菌高度保守區設計,不會(huì )跟其他細菌的 DNA 發(fā)生交叉反應。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè )晒舛?PCR 反應。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規格及成分

成分

包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色蓋)

熒光PCR 專(zhuān)用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

牛棒桿菌探針?lè )?/span>qPCR 引物混 合液

100 μL(白蓋)

牛棒桿菌qPCR 探針

50 μL(棕色管)

牛棒桿菌探針?lè )?/span>qPCR 陽(yáng)性對照 (1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(黃蓋)

使用手冊

1

運輸及保存低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑樣品DNA。

【使用方法】、稀釋標準曲線(xiàn)樣品(以10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對照。

1. 標記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液,**用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品,**設置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性 對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽(yáng)性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式細菌DNAout。本試劑盒免費贈送 20次免DNA 提取的核酸釋放劑,本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為 PCR 模板,省略 了 DNA 提取步驟。

三、、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標準曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對照(用第 4 號管的陽(yáng)性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設 置完畢后才設置陽(yáng)性對照,并且陽(yáng)性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分/每管

樣品管

N+2 個(gè)

RT-PCR

陰性對照

標準曲線(xiàn)樣品管

1-6 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

牛棒桿菌 qPCR 探針

1 μL

1 μL

1 μL

牛棒桿菌探針?lè )?/span> qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個(gè)待測 DNA 模板

7 μL

-

-

超純水

-

7 μL

-

7 步所得標準曲線(xiàn)樣品稀釋液(2-7 號)

-

-

7 μL(2 號樣到2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11.蓋上蓋子后上機,按面參數進(jìn)行 RT-PCR

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預變性

95℃

5 min

PCR 反應

40 個(gè)循環(huán))

95℃

15sec

60℃

60sec(采集 FAM 通道的熒光信號)

四、數據處

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽(yáng)性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線(xiàn)。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線(xiàn)上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽(yáng)性對照必須有熒光對數增長(cháng),有典型擴增曲線(xiàn),Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實(shí)驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。


買(mǎi)家數量成交時(shí)間
正品保障

確保所有產(chǎn)品都是原裝正品

優(yōu)質(zhì)服務(wù)

優(yōu)質(zhì)服務(wù),售后無(wú)憂(yōu)

安全包裝

統一包裝,保障產(chǎn)品安全運輸

正規發(fā)票

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